Vaksin yang dilemahkan melibatkan penggunaan agen pernafasan hidup yang telah dimusnahkan oleh virulen, sehingga tidak patogenik lagi untuk manusia.
Vaksin-vaksin ini pada umumnya lebih berkuasa untuk menjejaskan imuniti perlindungan daripada vaksin yang tidak diaktifkan. Malah, ejen berjangkit yang dilemahkan masih dapat meniru, walaupun dalam had tertentu, untuk meniru jangkitan sebenar.
Ejen menular dilemahkan diperoleh dengan memajukan pertumbuhan sel-sel (virus) atau media kultur (bakteria), untuk mengurangkan kapasiti pertumbuhannya dalam sel-sel manusia. Masalah utama dengan jenis vaksin ini ialah pengecilan mungkin tidak stabil, jadi mikroorganisma boleh kembali menjadi ganas.
Vaksin untuk campak, beguk, poliomielitis (vaksin Sabin) dan demam kuning terdiri daripada virus hidup dan dilemahkan.
