keluasan
Immunofixation adalah ujian makmal yang membolehkan pengenalan dan penyaringan globulin gamma hadir dalam sampel biologi.
Secara terperinci, analisis ini membolehkan untuk belajar - dalam darah pesakit atau air kencing - kelas immunoglobulin (IgA, IgG, IgM, IgE atau IgD) dan jenis rantai cahaya kappa atau lambda, mengikut pergerakan electrophoretic tertentu mereka . Selepas itu, untuk mengenal pasti gamma globulin yang terlibat, imunofixation melibatkan inokulasi antigen spesifik untuk serpihan atau antibodi yang berkaitan ( anti-immunoglobulin antisera ): kehadiran pengubahan yang disyaki disahkan oleh pembentukan daripada mendakan, kelihatan kepada mata telanjang atau mikroskop.
Maklumat ini sangat penting untuk menubuhkan, khususnya, diagnosis patologi sel plasma (gammopathies atau dyscrasias sel plasma). Immunofixation sangat berguna untuk penilaian dan pemantauan pelbagai myeloma, macroglobulinemia Waldenström dan amiloidid utama (juga dikenali sebagai rantai amiloidosis).
apa
Immunofixation (atau immunoelectrophoresis, juga disingkat dalam akronim IFE ) adalah teknik yang dapat menentukan sama ada dan mana kelas imunoglobulin (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) atau jenis rantai cahaya kappa atau lambda, terdapat dalam lebihan atau kecacatan dalam serum dan air kencing pesakit.
Rantai cahaya kappa dan lambda mewakili komponen monoklonal, iaitu antibodi dengan struktur kimia yang serupa.
Serum dan Immunofixation Urin: Bilakah ia ditunjukkan?
Dysplasias plasmacellular atau gammopathies adalah kumpulan heterogen gangguan etiologi yang tidak diketahui dicirikan oleh:
- Proliferasi yang tidak seimbang dari klon sel B ;
- Kehadiran dalam serum dan / atau air kencing jenis imunoglobulin (atau subunit polipeptida), secara struktur dan elektroporetikal homogen ( monoklonal ).
Biasanya, dyscrasias sel plasma didiagnosis menggunakan elektroforesis protein serum dan urin, diikuti oleh imunofiksasi serum (IFE).
Pada masa yang sama, ujian darah boleh ditetapkan untuk mengukur jumlah kepekatan imunoglobulin (IgG + IgM + IgA).
Untuk mengetahui lebih lanjut: Immunoglobulins - Apa yang mereka, Bagaimana mereka diukur dan Nilai Rujukan »Immunofixation: asas asas
Immunofixation adalah pemeriksaan yang melibatkan dua fasa (pertama elektroforesis dalam gel agarose, maka imunoprecipitation dengan antisera spesifik ).
Langkah pertama imunofiksasi adalah sama dengan yang ELECTROPHORESIS protein (atau protidogramma), maka perlu diingat beberapa konsep:
- Elektroforesis adalah analisis makmal yang membolehkan menentukan kuantiti protein yang ada dalam serum darah atau dalam sampel biologi yang lain dan, bagi setiap pecahan, mendedahkan jika terdapat sebarang anomali dari segi kualiti. Khususnya, peperiksaan ini membolehkan pemisahan protein menjadi lima kumpulan: albumin, alpha 1 globulin, alfa 2 globulin, beta globulin dan gamma globulin ; yang terakhir disiasat lebih khusus dengan imunofiksasi.
- Elektroforesis adalah kaedah pemisahan berdasarkan kelajuan penghijrahan yang berbeza dari zarah-zarah yang dikenakan elektrik, melalui penyelesaian dan medium sokongan lengai, di bawah pengaruh medan elektrik, yang dihasilkan oleh arus langsung. Dalam amalan, peperiksaan mengeksploitasi caj elektrik dan jisim molekul protein yang terdapat dalam sampel pesakit. Di bawah gerak medan elektrik, makromolekul ini bermigrasi dan "kumpulan" mengikut jenis, bertindak balas kepada tekanan dengan cara yang khas. Hasilnya ( pengesanan elektroforetik ) terdiri daripada pelbagai puncak dan lengkung, yang mana pecahan protein sesuai. Biasanya, puncak pertama, lebih tinggi dan sempit, ialah albumin ; untuk mengikuti, kita melihat puncak globulin, jauh lebih rendah daripada albumin. Peningkatan atau pengurangan amplitud dan keamatan puncak yang terbentuk di jalan menunjukkan kehadiran protein yang lebih besar atau kurang dalam setiap kategori; Lebih banyak protein hadir dalam sebuah band, semakin tinggi puncaknya. Dalam kes globulin gamma, jika seseorang ingin mengetahui kuantiti masing-masing kelas yang berbeza (IgA, IgM, IgG dan lain-lain) ia perlu untuk menggunakan dos tunggal. Secara umum, lebih banyak globulin gamma hadir dalam sebuah band, semakin tinggi puncaknya; ketinggian sepadan dengan jumlah kuantiti protein kepunyaan kategori tertentu.
IMMUNOFISSATION menyediakan:
1) Elektroforesis Gel Agarosa : sampel pesakit (serum atau air kencing) didepositkan pada jalur electrophoretic, iaitu sokongan untuk penghijrahan (biasanya, gel agarose). Melalui penggunaan medan elektrik, dihasilkan oleh arus langsung, pemisahan dalam band yang berbeza diperolehi. Dalam praktiknya, setiap jenis gamma globulin hadir dalam campuran (iaitu dalam sampel pesakit) bermigrasi berdasarkan jisim molekul dan cas elektrik. Pergerakan electrophoretic yang berbeza gamma globulin memungkinkan untuk mengenal pasti mereka (masing-masing bertepatan dengan jalur tertentu dalam laluan electrophoretic) dan memerhatikan sebarang anomali.
2) Immunoprecipitation dengan Antisera Spesifik (Fiksasi) : antigen spesifik untuk antibodi tertentu atau serpihan ditambah secara individu ke setiap jalur electrophoretic (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-cahaya kappa atau anti-rantai) rantai cahaya lambda). Sekiranya terdapat protein monoklonal, interaksi antigen dengan antibodi yang sepadan akan menghasilkan jalur yang sempit (ini bermakna hasilnya positif) dan pembentukan endapan, boleh dilihat dengan mata telanjang atau mikroskop. Akhirnya, sampel diproses (iaitu dibasuh dan berwarna) untuk menghapuskan protein yang tidak dicetuskan, untuk mendapatkan pengeringan gel dan meneruskan pembacaan keputusan.
Kenapa ia berjalan
Apakah Imunofixation untuk?
Imunofiksasi serum adalah peperiksaan yang ditunjukkan untuk mendiagnosis atau memantau penyakit yang dicirikan oleh perubahan globulin gamma, terutama apabila ia berkaitan dengan pengeluaran komponen monoklonal ( gammopathy monoklonal ).
Untuk mengetahui lebih lanjut: Gammopathy Monoclonal - Apa dan yang mana »Immunofixation berguna dalam kes-kes diskrasia sel plasma yang disyaki dan adalah asas untuk kajian MIELOMA (dan patologi yang berkaitan) dan MGUS (akronim untuk "gammopathies monoklonal yang tidak menentu").
Ujian ini juga membolehkan kita menilai macroglobulinemia Waldenström dan rantai amiloidosis ( AL ).
Immunofixation: bilakah peperiksaan ditetapkan?
Petunjuk untuk imunofiksasi adalah selepas bukti klinikal atau makmal yang menimbulkan syak wasangka perubahan antibodi monoklonal atau imunoglobulin dalam serum atau air kencing.
Sebagai contoh, peperiksaan ini membolehkan untuk memperdalam hasil elektroforesis seroprotective atau kencing: apabila dalam pengesanan elektroforetik, band-band yang sesuai dengan globulin gamma menyimpang dari normal, imunofiksasi mengenalpasti protein mana yang diubah, dari segi kuantiti dan kualiti.
Secara ringkas, imunofiksasi serum boleh ditetapkan:
- Dalam kes di mana ujian makmal lain memberikan hasil yang tidak normal, dari segi ketiadaan atau lebih kecil dan lebih banyak kuantiti protein plasma yang berkaitan dengan norma;
- Apabila kehadiran penyakit yang dicirikan oleh pengeluaran komponen monoklonal disyaki, seperti:
- Multiple myeloma dan variannya;
- Macroglobulinemia Waldenström;
- amyloidosis;
- Apabila pesakit mengalami tanda-tanda dan tanda-tanda yang menunjukkan adanya gammopathy monoklonal atau multiple myeloma, seperti:
- Ubat tulang;
- anemia;
- Keletihan yang mudah;
- Jangkitan berulang;
- Fraktur yang tidak dapat dijelaskan.
Dalam kes multiple myeloma, elektroforesis protein dan imunofiksasi adalah utiliti yang banyak juga untuk memantau kemajuan penyakit (susulan).
Immunofixation: di mana sampel boleh dilakukan?
Sampel biologi yang boleh dikenakan imunofiksasi adalah terutamanya:
- Serum (imunofiksasi serum);
- Urin (imunofiksasi kencing);
- Minuman * (immunofixation minuman keras).
* Nota : CSF atau cecair cerebrospinal adalah cecair yang meresap dan melindungi otak, saraf tunjang, saraf kranial dan akar tulang belakang.
Nilai normal
Hasil NEGATIF bagi imunofiksasi serum dan kencing untuk gamma globulin monoklonal atau poliklonal dianggap NORMAL .
Gamma globulins
Gamma globulins membentuk 9-20% daripada jumlah protein plasma.
- Nilai rujukan Gamma globulin : 0.9-1.4 g / dl
Mengenai jumlah kepekatan imunoglobulin ( IgG + IgM + IgA ), dipercayai bahawa nilai antara 600 dan 2300 mg / dl adalah normal.
- Nilai rujukan Immunogobulins dalam serum :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0.3-0.4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Nota : selang rujukan peperiksaan mungkin berbeza sedikit bergantung kepada umur, jantina dan instrumentasi yang digunakan dalam makmal analisis. Atas sebab ini, lebih baik untuk merujuk rentang yang disenaraikan secara langsung pada laporan. Ia juga harus diingat bahawa hasil analisis harus dinilai secara keseluruhan oleh pengamal umum, yang mengetahui riwayat medis pasien.
Nilai Tinggi - Punca
Peningkatan globulin gamma boleh:
- Polyclonal, jika penghasilan imunoglobulin adalah heterogen, iaitu semua komponen globulin gamma - dihasilkan atau terbit dari sel-sel plasma yang berlainan - dipengaruhi oleh kenaikan;
- Monoklonal, apabila gamma globulin dihasilkan atau diperolehi daripada satu jenis (klon) sel plasma.
Peningkatan globulin gamma poliklonal mungkin dikaitkan dengan:
- Penyakit radang kronik;
- Artritis reumatoid;
- Sistemik lupus erythematosus;
- Penyakit hati kronik (seperti hepatitis dan sirosis);
- Jangkitan akut dan kronik;
- Imunisasi terkini;
- Sesetengah penyakit tumor.
Nilai tinggi gamma globulin monoklonal mungkin menunjukkan, sebaliknya, kehadiran:
- Beberapa neoplasma dan keradangan kronik;
- Multiple myeloma;
- limfoma;
- Makroglobulinemia Waldenström.
Lebihan gamma globulin dipanggil hypergammaglobulinemia, sementara kekurangannya dikenali sebagai hypogammaglobulinemia .
Nilai Rendah - Punca
Pengurangan gamma globulin mungkin menunjukkan kehadiran pelbagai penyakit sistem imun pada asas genetik, termasuk agammaglobulinemia, atau imunodefisiensi sekunder (contohnya AIDS, kegagalan buah pinggang, sepsis akut dan sindrom Cushing).
Penurunan nilai gamma globulin juga boleh bergantung kepada penggunaan ubat cytostatic, imunosuppressants dan steroid.
Bagaimana ia dilakukan
Imunofiksasi serum
Imunofiksasi serum melibatkan lukisan darah yang mudah dari vena tangan. Serum diperolehi dengan sentrifugasi sampel biologi; ini membolehkan, sebenarnya, untuk memisahkan pecahan yang mengandungi sel (bahagian korpuskular) dari satu cecair darah (plasma). Serum darah bebas daripada faktor koagulasi (fibrinogen, faktor VIII, faktor V dan prothrombin).
Immunofixation Urine
Untuk melakukan imunofiksasi kencing adalah perlu untuk mengumpul sedikit air kencing di dalam bekas steril khas. Berdasarkan petunjuk doktor dan makmal, sampel boleh dikumpulkan tanpa masa yang tepat ( rawak ) atau dalam masa 24 jam .
Immunofixation of the Liquor
Analisis memerlukan pengambilan sedikit cecair serebrospinal, melalui penyisipan jarum, di dalam rongga tulang belakang ( lubang lumbar ).
penyediaan
Immunofixation: bagaimana anda mempersiapkan peperiksaan?
- Sebelum pensampelan darah, sesetengah makmal mungkin memerlukan anda berpuasa sekurang-kurangnya 10-12 jam. Pada masa ini, sedikit air yang dibenarkan.
- Immunofixation boleh dilakukan pada air kencing yang dikumpulkan pada waktu tertentu (rawak) atau selama 24 jam, jadi perlu mendapatkan kontainer steril yang sesuai terlebih dahulu.
- Adapun imunofiksasi minuman keras, sebaliknya, tidak ada penyediaan khusus.
Apa yang boleh mengubah hasil peperiksaan?
Sesetengah ubat boleh mempengaruhi hasil imunofiksasi, jadi dinasihatkan untuk melaporkan apa-apa terapi dadah yang sedang berjalan kepada doktor.
Dalam enam bulan sebelum peperiksaan, pentadbiran vaksin (imunisasi) dan penggunaan ubat, seperti phenytoin, procainamide, pil perancang, metadon dan gamma globulin terapeutik, boleh meningkatkan kepekatan imunoglobulin. Ubat-ubatan lain yang dapat mengubah hasil ujian adalah kortikosteroid, neomycin, asid asetilsalicylic dan chlorpromazine.
Tafsiran Keputusan
Hasil imunofiksasi dievaluasi dalam kombinasi dengan hasil analisis lain. Tafsiran dapatan adalah tanggungjawab pengamal am atau pakar rujukan yang boleh mengenalpasti dan membandingkan perubahan yang mempengaruhi gamma globulin tertentu (contohnya, band yang bertepatan dengan immunoglobulin G) kepada penyakit tertentu. Penilaian ini mengesahkan atau menyokong hipotesis diagnostik: secara amnya, imunofiksasi dapat mendedahkan profil gamma globulin biasa atau mengenal pasti protein monoklonal atau model poliklonal .
Apabila penyakit ditakrifkan, imunofiksasi boleh dilakukan untuk:
- Memantau penyakit dari masa ke masa, kemudian ikuti kursus (tindak lanjut);
- Semak keberkesanan protokol terapeutik .
Kebaikan dan Kekurangan Imunofixation
Berbanding elektroforesis protein, imunofiksasi:
- Ia lebih cepat : hasil imunisasi biasanya diperoleh dalam masa tiga jam;
- Ia lebih sensitif (walaupun sedikit): imunofiksasi dapat mengungkap imunoglobulin yang dikeluarkan dari elektroforesis protein, terutama pada kepekatan rendah (kurang dari 1 gram / liter).
Tambahan pula, imunofiksasi:
- Ia boleh sebahagiannya automatik ;
- Ia mudah dibaca dan difahami .
Walau bagaimanapun, imunofiksasi lebih mahal daripada elektroforesis protein dan hanya membenarkan analisis gamma globulin .
Keputusan biasa
Dalam imunofiksasi, laluan normal termasuk:
- Band yang bertepatan dengan immunoglobulin G ( IgG ) yang lebih gelap;
- Band yang bersamaan dengan immunoglobulin A ( IgA ) yang paling ringan;
- Ketiadaan band untuk immunoglobulin M ( IgM );
- Band kappa lebih padat daripada lambda (rantai ringan), dengan nisbah 2: 1.
Dalam hasil yang normal, band-band itu besar dan terdapat pengurangan secara beransur-ansur dalam ketumpatan warna ke arah tepi jalur immunoelectrophoresis.
Globulin gamma poliklonal
Dalam sesetengah kes, semua band imunofiksasi sama rata sama rata. Model ini mewakili kehadiran imunoglobulin poliklonal . Juga dalam kes ini, band-band yang luas dan peralihan ke tepi jalur immunoelectrophoretic adalah secara beransur-ansur. Band IgM - biasanya tidak hadir - luas.
Globulin gamma monoklonal
Apabila jalur sempit dengan tajam tajam dapat dikenalpasti dalam laluan imunofiksasi, ini bermakna pencarian untuk komponen monoklonal adalah positif .
Pengenalan imunoglobulin monoklonal berguna dalam diagnosis syarat-syarat berikut:
- Gammopathy monoklonal yang tidak dapat ditentukan (MGUS);
- Multiple myeloma;
- Makroglobulinemia Waldenstrom;
- Amyloidosis.
Tambahan pula, imunofiksasi boleh digunakan untuk memantau terapi dalam discrasias sel plasma (iaitu pelbagai myeloma dan macroglobulinemia Waldenstrom). Jika tahap protein monoklonal menurun atau tidak dapat dikesan selepas kemoterapi, ia mungkin menunjukkan tindak balas terhadap rawatan . Sebaliknya, protein monoklonal yang berterusan walaupun rawatan adalah tanda penyakit refraktori .
Sila ambil perhatian . Hasil imunofiksasi negatif tidak selalunya tidak termasuk diskrasia sel plasma. Sebagai contoh, pelbagai myeloma atau oligosecretory bukan sekretor boleh memberi keputusan negatif dalam air kencing dan serum. Oleh itu, jika kecurigaan diagnostik untuk gammopathy masih tinggi, penentuan nisbah Rantai Cahaya Kappa / Lambda Libere ( K / L ) ditunjukkan.
Immunofixation dan diagnosis Multiple Sclerosis
Imunofiksasi cecair cerebrospinal (minuman keras) ditetapkan apabila doktor mengesyaki kehadiran sklerosis berganda . Dalam kes ini, laluan yang ditentukan adalah ciri, kerana ia menyoroti kehadiran band-band oligoklonal yang dipanggil. Hasilnya dilaporkan dalam laporan makmal sebagai positif . Perlu dipertimbangkan bahawa band-band biasanya tidak diperhatikan dalam imunofiksasi serum, kerana ia berkaitan dengan pengeluaran globulin gamma intrathek .
Walau bagaimanapun, perlu diperhatikan bahawa penemuan ini tidak semestinya mengesahkan diagnosis, kerana keadaan lain boleh berlaku dengan band oligoklonal dalam cecair serebrospinal.
Dengan kata lain, pengenalpastian band oligoklonal dengan imunofiksasi minuman keras sangat berguna untuk menyokong diagnosis sklerosis berganda, tetapi mesti disahkan oleh penyiasatan lain . Keadaan lain yang dapat memberikan hasil ini adalah keradangan sistem saraf pusat, termasuk: encephalitis yang berkaitan dengan HIV, neurosifilis, neurosarcoidosis, Lyme meningoencephalitis, keganasan CNS, neuromyelitis optik dan myelitis melintang.
