Essay ABTS
Ia adalah satu kaedah analisis yang menggunakan pengukuran spektrofotometrik untuk menentukan kapasiti antioksida sampel. Menggunakan spektrofotometer UV-Vis, penyerapan larutan yang mengandungi radikal ABTS • + diukur, dihasilkan oleh pengoksidaan ABST (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonat), bahan tidak berwarna dalam bentuk radikal berwarna dengan menyerap ciri-ciri panjang gelombang dalam julat yang boleh dilihat Tambahan kepada larutan ABTS • + molekul antioksidan, yang boleh bertindak dengan memindahkan kedua-dua hidrogen dan elektron, menentukan pengurangan radikal ke bentuk tidak berwarna, dengan perubahan warna akibat tindak balas tindak balas. Pelunturan ini, berkadar dengan jumlah antioksidan yang ada, boleh diukur sebagai penurunan penyerapan dalam masa tertentu pada panjang gelombang tertentu (734 nm). Kekuatan antioksidan dinyatakan dengan perbandingan dengan nilai-nilai penyerapan yang diukur untuk kuantiti yang diketahui oleh molekul antioxidant yang dipilih sebagai standard rujukan, yang biasanya asid askorbik atau Trolox (dalam kes ini kita bercakap tentang aktiviti antioksidan Kapasitas Antioksida TEAC Trolox yang bersamaan.
Pengukuran kuasa antioksidan berdasarkan penggunaan ABTS mempunyai kelebihan mudah dan cepat. Selain itu, ia membolehkan pengukuran bahan antioksida baik hidrofilik dan lipophilic dalam pelbagai pH yang luas. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa radikal yang digunakan (ABTS • +) bukan fisiologi dan tidak wujud dalam sistem biologi dan masalah pengulangan pengukuran disebabkan oleh kinetik reaksi pelbagai antioksidan yang terlibat sering diserlahkan.
FRAP (Power Reducing Antioksidan Ferum)
Ujian FRAP mengukur keupayaan mengurangkan antioksidan terhadap ion besi. Ia adalah satu kaedah yang berasaskan pemindahan elektron, di mana ion besi lulus dari Fe3 + hingga Fe2 +. Dalam keadaan tertentu pH (3.6) dan dengan kehadiran TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazine), ion-ion ini membentuk kompleks dengan ciri-ciri yang berbeza, khususnya turunan yang dikurangkan (Fe2 + -TPTZ) menganggap warna biru yang mempunyai penyerapan maksimum pada 593 nm yang boleh diukur spectrophotometrically. Oleh itu, kapasiti mengurangkan bahan antioksidan dapat diukur sebagai perubahan dalam penyerapan larutan yang mengandung oksidan pada panjang gelombang yang ditetapkan dengan perbandingan dengan variasi relatif terhadap suatu standar (mis. Asid askorbat).
Ujian FRAP direka untuk mengukur kuasa mengurangkan plasma, tetapi kemudian disesuaikan untuk menguji kapasiti antioksidan bagi sebatian tulen dan matrik kompleks. Malah, kerana kaedah ini membolehkan untuk menilai hanya kapasiti pengurangan oleh pemindahan elektron, dengan sepenuhnya mengabaikan tindakan antioksidan yang bertindak melalui pemindahan hidrogen, ia tidak membenarkan untuk mengukur sumbangan molekul, seperti thiols dan protein, yang memainkan peranan antioksidan asas dalam cecair biologi (contohnya darah). Kelebihan menggunakan kaedah ini ialah ia merupakan kaedah paling mudah, paling cepat dan paling murah untuk menentukan keupayaan antioksidan dalam vitro.
Ujian DPPH
2, 2-diphenyl-1-picrilhydrazyl (DPPH •) adalah radikal nitrogen yang sangat stabil dan boleh didapati secara komersil, dicirikan oleh warna ungu-merah yang kuat, yang membosankan apabila dikurangkan kehadiran molekul dengan kapasiti antioksidan. Dengan pengukuran spektrofotometri pada 517 nm perubahan dalam penyerapan larutan DPPH selepas tindak balas dengan sebatian antioksidan, adalah mungkin untuk mengukur kapasiti pengurangan bahan ujian sama ada ia bertindak dengan pemindahan hidrogen atau pemindahan elektron. Hasilnya secara umum dinyatakan sebagai IC50, iaitu jumlah antioksidan yang mampu mengurangkan kepekatan DPPH awal sebanyak 50%.
Ini adalah kaedah yang cepat, ringkas dan murah. Had teknik analitik ini diberikan oleh kemungkinan hasil analisisnya telah diputarbelitkan dalam kes di mana molekul yang di bawah pemeriksaan menyerap dalam julat panjang gelombang radikal DPPH yang sama atau dengan kehadiran molekul besar yang berkumpul dengan sterik yang tidak mereka datang untuk bertindak balas dengan bahagian reaktif radikal. Ini menyebabkan DPPH bertindak balas dengan antioksidan sehingga 1000 kali lebih perlahan daripada radikal peroksil.
Ujian PCL (Photochemiluminescence)
Ujian PCL didasarkan pada tindak balas spesies radikal tertentu, anion superoxide (O2 • -), yang dihasilkan fotokimia oleh radiasi UV, dengan sebatian yang mampu mengeluarkan kemiluminescence. Penanda yang digunakan ialah luminol, molekul yang apabila dioksidakan oleh radikal bebas memancarkan cahaya yang boleh diukur dengan menggunakan alat khas (Photochem®). Kehadiran bahan antioksidan dalam campuran pencairan menyahaktifkan spesies radikal menghalang pelepasan kemiluminescence. Analisis PCL sangat cepat dan sensitif. Selain itu, dengan menggunakan dua protokol analitis yang berbeza, yang dikenali sebagai ACW (larut Air Keasaman Antioksidan) dan ACL (Larutan Antioksidan Kapasiti Lipid), sumbangan kepada jumlah kapasiti antioksidan komponen larut air (flavonoid, vitamin E) boleh diukur untuk sebatian yang sama. C, asid amino, dan sebagainya) daripada liposoluble (tocopherols, tocotrienols, karotenoid, dan lain-lain). Keupayaan antioksidan produk dalam pemeriksaan diperoleh dengan membandingkan nilai-nilai yang direkodkan dengan pengukuran yang berkaitan dengan molekul rujukan standard, asid askorbik untuk protokol ACL dan Trolox untuk protokol ACW.
